الهيستولوجي هو علم دراسة الأنسجة والسايتولوجي هو علم دراسة الخلايا، وكلمة هستو تعني نسيج، وسايتو تعني خلية، وأولوجي تعني علم.

لدراسة الخلايا والأنسجة نحتاج إلى ميكروسكوبات لتكبير الأجزاء الصغيرة التي لا يمكن رؤيتها بالعين المجردة.

معظم الأنسجة والأعضاء تكون سميكة جداً بحيث لا يستطيع ضوء الميكروسكوب اختراقها، لذلك نحتاج إلى تقطيعها إلى مقاطع رقيقة جداً وشفافة لنتمكن من رؤيتها تحت الميكروسكوب.

ان شاء الله النهاردة اول محاضرة

دراسة الانسجة وعلم دراسة الخلقية

معكم دكتور محمد خالد

نكمل مع بعض ان شاء الله طول الرحلة. اه رحلة الهيستولوجي

ان الهيستولوجي مادة خفيفة جدا ونزيزة جدا لو تفهمت. وتذكرت

صح بالطريقة الصح. فاحنا نستمر كده مع بعض ان شاء الله ونركز

مع بعض كده في المحاضرة. نبتدي بسم الله الرحمن الرحيم من اه

الهيستولوجي والسايتولوجي. يعني ايه هستولوجي ويعني ايه سايتولوجي.

هستو جاية من كلمة أغريقية قديمة بمعنى نسيك

وصيتو جاية من أصلها كلمة أغريقية قديمة برضو معناها خلية

سالي

أولوجي معناها علم

فإحنا بندرس علم دراسة الخلايا وعلم دراسة الأنسجة

طيب إزاي هندرس الخلايا وإزاي هندرس الأنسجة

واذا هو علم دراسة الخلايا بالضبط وعلم دراسة الأنسجة

لأنه لدينا إجراءات مختلفة من المطلوبة. لدينا أمر لدينا دراسة الخلايا

ونحتاج ميكروسكوب لتكبير أضعاف مضاعفة عن ما نراه بإعاناتنا

نحتاج إلى ميكروسكوبات ونحتاج إلى تركيبة الخلايا

ازاي بميكروسكوب ازاي بنحن نعمل بالميكروسكوب طيب اه

بيقول لك ان اعز معظم الانسجة والاعضاء بتبقى سميكة جدا ان ضوء

الميكروسكوب يخترقها فاحنا بنحتاج ان احنا نعمل النسيج والعضو

دوت كمادة رخيخة جدا مادة في شدة الرقة عشان الضوء يقدر يخترقها

ونستطيع أن نرى تحت الميكروسكول

تكون شفافة

تكون رفيعة لدرجة أنها شفافة

تستطيع أن ترى من خلالها

تبقى البوضوح لكن تستطيع أن ترى من خلالها

تبقى بخلالها

ثم رفيعة

شفافة

مقاطع شفافة رفيعة

ونقوم بتقطيعها منهم ونضعها على أزاز

ونضعها على أزاز

عشان نعرف نعمل

للتركيبات الداخلية.

أشهر طريقة لتحضير الأنسجة للميكروسكوب الضوئي هي تقنية البرافين، حيث يتم وضع النسيج داخل مادة البرافين التي تكون صلبة في درجة حرارة الغرفة.

يتم إذابة البرافين لتغليف النسيج بداخله ثم تبريده ليصبح صلباً، وذلك لأن النسيج طري ولا يمكن قطعه بسهولة بدون البرافين الصلب.

for light microscope for preparation for light microscope the paraffin technique is the most commonly used technique. طبعا احنا

بنحتاج كده الموضوع مش عشوائي. الموضوع مش ان انا اخد العينة من الجسم او من اي حتة وراح احطها على حتة ازاز وقطعها حتى

وخلاص كده الموضوع انتهى وهشوف الدنيا. لا انا محتاج تكنيكس.

محتاج تكنيكات طرق. اه فنيات. عشان اعرف اعمل الخطوات دي كلها.

واشهر طريقة بتستخدم هي البرافين. طيب ايه هو البرافين?

البرافين هو مادة صلبة. اه مع درجة حرارة الغرفة العادية بيبقى

مادة صلبة جدا. احنا بنعوز ايه من البرافين دوت? احنا هنعوز

مبدئيا كده نحن نحط النسيج جوه البروفين. طب ازاي? ازاي

والبروفين بيكون صلب. يبقى محتاجين نحنا ندوبه نسيحه بحيس

ان احنا نحط نعرف نحط التشوق النسيج جوه البروفين نزرعه

جواه وبعد كده بنحط البروفين في درجة حرارة الغرفة بنبرده

بحيث انه يبقى صلب فنعرف ان احنا نقطع طيشو. طب ليه ما نقطعش

الطيشو من غير برافين? ليه محتاجين برافين? لان الطيشو طارية

احنا عايزينه. فاحنا محتاجين مادة صلبة عشان نعرف نقطع بشكل

كويس.

خلينا ناخد بقى بشوية تفصيل. وناخدها بخطوات. وابو الخطوة معنا

أول خطوة في تحضير النسيج هي التثبيت للحفاظ على النسيج من التحلل الذاتي والتعفن بالبكتيريا بعد خروجه من الجسم.

يتم التثبيت باستخدام الفورمالين الذي يحافظ على النسيج ويجعله أكثر صلابة لتسهيل قطعه.

ما هي التثبيت للنسيج الذي نحصل عليه؟

نحتاج إلى تثبيته وحافظه

نحافظ على النسيج

من أي طيب نحافظ عليه؟

نحافظ عليه من الـ

لأن مجرد أن الخلية أو النسيج يخرج من الجسم سيبدأ يكسر في نفسه

auto يعني حاجة تلقائية

lysis يعني تكسير تلقائي

الواحد هو يكسر

فنحن نحميه من هذا

نحميه من البيوتريفكشن

من التعفن والتعفن من البكتيريا

طبعاً هناك بكتيريا في الجو

هناك بكتيريا في النسيج نفسه

فمجرد أنه يخرج فقد الحماية كلها

فممكن يحصل له تعفن بالبكتيريا

ونفقد النسيج الطبيعي ونفقد كل شيء

نجعله أكثر صلابة بالتثبيت

نحتاجه بالتثبيت

بالتثبيت سيكون صلبا أكثر

فنستطيع القطاع بسهولة أكثر

تمام؟ تمام

إذا نحن لكي نستطيع القطاع

هل سنخرجه من الجسم

وهو سيبقى بحالته الطبيعية كده تمام

وانا هبغر بالخلايا بتاعتي والاستركتر والتركيبة بتاعتي والترتيب بتاعي وكل حاجة

لا طبعا مجرد انه يخرج الجسم كان موفله بيئة معينة انت خرجت ببيئة تانية

فكل ده يروح كل ده يكسر كل ده يختفي

فاحنا محتاجين احنا نثبته الأول

preservation

نعمله preservation

بعد ما عملنا preservation

نحن نعمل preservation بأيه الأول

الفرمالي اللي هي المادة اللي بنحافظ بها الجس

نفس المادة اللي بنحافظ بها الجس في الأماتومي

نحافظ على التشوي هنا في الهيكستوروجي

برمالية

طيب

بعد بدعم و ضع مادة ريكفت المرمال حكي و نحافظ عليها

هناخسل بالمية

بالمية بص بص

هناخسل بالمية اليه

ان في شوية فرمالين زيادة

حيث بيحتاج احصل عليها

دي كاد تاني خطوة

تالت خطوة

الخطوة التالية هي إزالة الماء من النسيج تدريجياً باستخدام الكحول، لأن البرافين لا يختلط بالماء ويحتاج النسيج أن يكون خالياً من الماء ليتم غمره بالبرافين.

يتم تنظيف النسيج بالكحول تدريجياً بتركيزات متزايدة (70% ثم 80% ثم 90% ثم 100%) لتجنب تلف الخلايا.

D Hydration

يعني ايه D Hydration

يعني مية أو ترطيب دي يعني التخلي عن أو إزالة. يبقى إزالة الترطيب

إزالة المية. مية ايه? هنزيل مية ايه? وليه هنزيل المية? ايه

الضرر في المية? النسيق كده كده فيه مية. تمام? النسيق كده كده

فيه مية. طيب احنا ليه عايزين نشيل مية? بيقول لك بقى ان البرافين

الـPROFOBIC بمعنى بيخاف من المية بيخاف بيخاف من المية عشان احنا

محتاجين نعمل ايه اصفان محتاجين نحط التشو في البروفين. طب البروفين

بيخاف من التشو اللي في مية. فانا اشيل مية من التشو عشان ارفع

احطه جوا البروفين. تمام? يبقى انا محتاج اشيل المية من التشو.

يبقى بشكل تدريجي. عشان نخلي عنده قدرة انه يمزج. يمزج او

يتمزج مع التشو. تمام? ببسيطة. طيب رابع خطوة. بنضيف او مسح.

بنمسح ايه بالزبط قبل ما نعرف حاننا بنمسح ايه هو احنا كنا بننضف

المية بايه بنستخدم ايه بنستخدم الكحول اللطيف اللي ظروف بتاعنا

دوت هو اللي بنستخدمه الكحول العادي ده احنا بنلوشه ده بننضفه

مع الالكحل. قالك انه برضو في تعرض. يعني برضو الالكحل بيتعرض

مع البروفين. ما بيعرفش انه البروفين ما بيعرفش انه يخش في

فيها الكحول. طب انا هنضف الماء بايه? ما عنديش غير الكحول. يبقى

انا عندي اه هعمل ايه بقى? هنضف الكحول بمادة تانية بمادة تالتة

خالص. اه بالنسبة يعني احنا بنضفه بايه سبعين في المية. بعد

كده تمانين في المية. وبعد كده تسعين في المية. بعد كده مية في

المية الكحول. تدريجي تدريجي عشان الخلايا ما تكشش. هي بتكش من

بتخيف كده من الالكهول. احنا واحدة واحدة واحدة واحدة. نحطوش

في مية مية مرة واحدة. لا بنحط سبعين تمانين تسعين. وهكزا

بالتدريج. نروح لخطوة اللي هي رابع خطوة.

الزيلين يستخدم لإزالة الكحول من النسيج ويذيب البرافين ليجعل النسيج أكثر شفافية ويسمح للبرافين بالدخول للنسيج.

اسمها. الزيلين دي بتنظف الالكهول. طيب الزيلين دي بتعمل ايه

بالضبط? ايه وظيفة الزيلين? الزيلين بيليكوفاي البرفين. يعني

بيدوب بيسيح البرافين. عشان نخلي التشو النسيج جاهز انه يخش في

البرافين. احنا قلنا ان احنا محتاجين نسيحه مش هي مش هنفع

مش هينفع يفضل صلب. مش هينفع يفضل صلب. مش هنفع نسيحه عشان

التشو تقف تخش جوة. فاحنا سيحنا بالايه? بالزايلين. اللي نضفنا

الالكحول. بقى الزايرين له له له تلات وظيف. ان هو بيدود. الالكحول.

وبيسيح مادة اللي محتاجين نحط فيها. وبيخلي التشو. بيخلي التشو

اكتر شفافية. عشان يعرف ايه? دهو بتاعه يعرف يخترخها اكتر عشان

لانها تسمى clearing

تمسح

الالكحول

تمسح او تديب

البروفين تخلي التشوذة

نفسها more transparent

more اكتر

الشفافية

وزرع

بعد إذابة البرافين بالزيلين، يتم زرع النسيج داخل البرافين السائل ثم تبريده ليصبح كتلة صلبة تحتوي على النسيج.

يتم تقطيع كتلة البرافين التي تحتوي على النسيج باستخدام جهاز يسمى rotatory microtome إلى شرائح رقيقة جداً توضع على شريحة زجاجية.

هحمل مين? البرافين بايه? بالتشو. هنبد ايه? هزرع ايه? هزرع

التشو. فين? في البرافين. بدي خطوة الخمسة ان انا ازرع بقى.

بتعمل ازاي? او بتتعمل اه بيه بالزبط? ونحط التشو في اللي

دوبنا بايه? بالزيلن. تمام? دوبناه بالزيلن. اه دوبناه اه

خلناه قابل ان في حاجة تخش جواه التشو

ودخلناه وخلص دي الخطوة الخامسة معايا

بقوا ايه

solid block

بعد ما دوبنا البرفن بنرجعه تاني

لدرجة حرارة الغرف عشان يبقى صلب

خلناه صلب خلص الموضوع انتهى

بنوصل للخطوة الستة التقطيع

هنقطعه بايه بمكنة اسمها

rotatory microtune

اه روتاتوري مايكروتون هوريكم روتاتوري مايكروتون نفس الوحدة

روتاتوري

دي الروتاتوري مايكروتون شايفين اسمها روتاتوري لانها دورة بتدور

هنا كده. هنا في المكان ده كده بتقعد تدور. بتقعد تقطع. ادي هو

شايفين العينة? العينة ايه? سمعت روتيتريو مايكروتون بنحط فيها

العينة وهي بتبتدي تقطع بقى الشرح صغيرة جدا. وبعد ما بقطع الشرح

الصغيرة جدا ديت من البرافين ومن التشو ببدأ احطها على جلس.

الشرائح تكون متشابهة في اللون والشكل لذلك نحتاج إلى صبغها باستخدام صبغات خاصة تسمى stains لتسهيل التمييز بين مكونات النسيج.

الخلية ازاي? والخلية كلها شابهة بعضها. يعني انجبت حتة ابيض في

السود كده ولا عارف افرق ده ولا عارف افرق ده ولا عارف اعرف ده

ايه ولا ده ايه ولا ده منفصل ولا دمع ده ولا دمع ده. محتاج ان

الوينهم. الوينهم بايه? السبغة. السبغة الوينهم بالسبغة. طيب.

اه السبغة دي. ايه هي السبغة? وزي بسبغة.

انا هنتكلم عن السبغة دلوقتي بس خلينا نتكلم على طبيعة السبغة.

السبغة دي ايه? مية سولد ايه بالزبط? السبغة مية. السبغة مية.

تمام? طب مين اللي مش بيحب المية? البرة. يبقى احنا مش عارف

نسبخ. طيب احنا قطعنا الشريحة والموضوع انتهى وحطناها على

ازازة. يعني خلصنا كل الخطوات اللي قبل كده. هنرجع بالعكس.

هناخد من اول ما ايه? من اول ما عملنا نقول ما عملنا لغاية الغسيل

ولغاية المية. احنا كنا عملنا ايه الاول? كنا شلنا بالواشنج. بعد

ده عملنا بالالكهول. شلنا المية بالالكهول يبقى مية. شلناها بالالكهول.

شننا بالزيلين. هذيك هي جمدنا بالبتاعة. احنا هنعمل عكس بقى.

الزيلين هنشيله. فيفضل ايه? فيفضل القلق. القلق. القلق. هنشيله

برضو بالتدريجة عشان ما يحصلش زي ما اتفقنا. فاضل ايه? فاضل

ماء. الماية دي هنحافظ عليها عشان ايه? عشان نعرف ندخل السبغة جوة

البروفين. جوة مش برفن بالوقت احنا شرنا البروفين خالص. جوة

التشو. تمام? دخلنا سبغناها هنقوم مراجعين العملية تاني.

هنرجع هنشيل المية عشان نعرف نحافظ على البروفين. هنشيل المية

بالالكحول ونشيل بالزايلين ونجمد.

تاني. حط البرفين في درجة حرات الغرفة. ويبقى ايه? مع تشو مرة

تانية. تمام? آآ بيقول لك ان دي ايكو ستينز يعني مائية طبيعتها

مائية. يعني محتاجين نحن نرجع الماية فيها تاني. بعد كده نشيل

منها الماية تاني. بعد ما خلصنا سبغ بعد ما عمل رجعنا الماية.

بعد الصبغ، يتم إزالة الماء من الشرائح مرة أخرى بالكحول والزيلين ثم تغطيتها بشريحة زجاجية أخرى (cover slip) لحمايتها ومنع تلوثها.

سبغنا شلنا المية كاية. طيب اخر خطوة خالص الكوفرينج بحاجة اسمها

كوفر سليب كوفر سليب يعني بعد ما حطينا حتة ازاز هنحط عليها حتة

ازاز تانية عشان نمنع بقى الايه اللي سبسكرايب منها تاخدش اللي

سبسكرايب منها تتا يحصل لها يحصل لها تلوث بالبكتيريا اه نسبتها

مكانها عشان ما تتزحلقش وبنوفر برضو بيئة كويسة للميكروسكوب

انواع يخش من خلالها بيئة نظيفة بيئة اه مناسبة لان المايكروسكوب

يخش فيها. سيطيبوا لنا مناسبة صفحة نظيفة للمايكروسكوب. دي كانت اه

ده كان اول جزء من المحاضرة معنا. ان شاء الله نكمل شرح اول تاني

جزء في الجزء التاني. نكمل بقى السبغات وانواع المايكروسكوبات.

معضية لذيذة جدا وسيرة الاهتمام جدا. انا زي التفسي بستمتع مرة

تانية وانا بشرح الكلام دوت. آآ بستمتع انها بتذكر كل الكلام ده

معكم. وبستمتع ان انا بشرحه لكم. بحاول اوصله لكم وان شاء الله يكون

واصل بافضل طريقة. وانت تكون فهمته قبل ما تكونوا حافزته لان

الحفز هيجي بالاستنتاج. انا فهمت هستنتج اه. ده كان كده اه. طب

ما بعد كده لازم اعمل كده. طب ما بعد كده لازم اعمل كده. وخطوات

استنتاجية كده وخفيفة ولطيفة. ان شاء الله اشوفكم المحاضرة

الجاية. اشوفكم على خير. السلام عليكم ورحمة الله وبركاته.